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微生物法尼基焦磷酸合酶(FPS)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)
BS-5186 微生物法尼基焦磷酸合酶(FPS)ELISA試劑盒
適用樣本：微生物培養(yǎng)上清液、細(xì)胞裂解液?
一、試劑盒組成?
組分名稱 規(guī)格(96T) 保存條件
預(yù)包被FPS抗體酶標(biāo)板 8×12孔 4℃避光
FPS標(biāo)準(zhǔn)品(凍干粉) 2管(100 ng/mL) -20℃長(zhǎng)期保存
生物素化檢測(cè)抗體 120 μL -80℃避光
酶結(jié)合物(HRP標(biāo)記) 12 mL 4℃避光
TMB顯色底物(A/B液) 各6 mL 4℃避光
終止液(2M H?SO?) 12 mL 室溫
20×濃縮洗滌液 60 mL 室溫
二、實(shí)驗(yàn)流程?
標(biāo)本制備?
微生物上清液：4℃、3000×g離心10分鐘，取上清檢測(cè)?。
細(xì)胞裂解液：加入RIPA裂解液，冰上裂解30分鐘后離心取上清。
試劑準(zhǔn)備?
洗滌液：1份濃縮液+19份蒸餾水稀釋?。
標(biāo)準(zhǔn)品梯度：用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液配制0.156-10 ng/mL系列濃度?。
檢測(cè)步驟?
加樣?：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣本，37℃孵育90分鐘。
洗滌?：洗板3次，每次浸泡1分鐘?。
加抗體?：每孔加入100μL生物素化抗體，37℃孵育60分鐘。
加酶結(jié)合物?：每孔加入100μL HRP標(biāo)記物，37℃避光孵育30分鐘。
顯色?：每孔加入90μL TMB底物，避光反應(yīng)15分鐘?。
終止?：每孔加入50μL終止液，振蕩混勻。
結(jié)果分析?
酶標(biāo)儀450nm讀取OD值，標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合計(jì)算樣本濃度?。
三、注意事項(xiàng)?
避免反復(fù)凍融樣本，分裝后-80℃保存?。
顯色反應(yīng)需避光，終止后30分鐘內(nèi)讀數(shù)?。
本試劑盒最小檢測(cè)限：0.05 ng/mL(參考標(biāo)準(zhǔn)曲線)?。
四、常見(jiàn)問(wèn)題?
高背景值?：洗滌不凈或孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線異常?：標(biāo)準(zhǔn)品稀釋誤差或板孔污染。
注：以上資料僅供參考，不作為實(shí)驗(yàn)依據(jù)，具體產(chǎn)品說(shuō)明請(qǐng)咨詢品牌供應(yīng)商或技術(shù)老師。
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